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嬰兒配方食品中的葉酸測定細解(結(jié)果分析篇)

更新時間:2018-05-15  |  點擊率:1225

繼上回的準(zhǔn)備篇和菌種篇,這回要真正測定了。在各個測定管孵育20小時以上獲得zui大濁度時,即可用渦旋振蕩器混勻,之后倒入1cm比色杯,在540nm處測定吸光度(OD值)。以未接種的對照管的OD值為0,依次測定標(biāo)準(zhǔn)管、樣本。如果對照管OD值>0.1,或者標(biāo)準(zhǔn)管OD值變化<40%,說明有雜菌或葉酸混入,需重做。

 

測完OD值后,以葉酸含量為橫坐標(biāo),每個標(biāo)準(zhǔn)管OD均值為縱坐標(biāo),做標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本OD值和標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以確定樣品對應(yīng)的葉酸含量。關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)曲線,有人發(fā)現(xiàn)OD值隨著葉酸濃度增加而增長趨緩, 略呈S形。若使用線性方法,數(shù)據(jù)點分布在曲線兩側(cè),求得的葉酸濃度不準(zhǔn)。建議使用EXCEL功能建立4階曲線方程,則曲線與實驗數(shù)據(jù)的擬合程度較好(1)。

圖片2.png

 

 

圖1. 1階線性擬合

 

圖片3.png

 

圖2. 4階線性擬合,優(yōu)于1階

 

采用直接提取法進行的葉酸含量可按如下公式進行計算。其前提是:每個樣品有2個管葉酸含量在0.10ng-0.80ng范圍內(nèi),且各管間偏差小于10%。

計算公式:

葉酸含量(g/100g)= (C*V*f)/m * 0.1

C為樣品稀釋液葉酸濃度(ng/ml),V為提取液定容體積(ml),f為樣本提取液稀釋倍數(shù),m為樣本質(zhì)量(g),0.1為ng/g換算為g/100g的系數(shù)。

 

以上就是相對完整的測定過程,不僅適合嬰兒配方食品,也適合谷薯、果蔬、豆及堅果類食品,只不過樣品需要用酶解提取法。大致過程如下:準(zhǔn)確稱量適量試樣(0.2-2g葉酸),如堅果類是0.2-2g,至0.0001g,轉(zhuǎn)入100ml錐形瓶中,加30mlPBS(含抗壞血酸作為葉酸保護劑),混勻5分鐘后高壓滅菌。再加1ml雞胰腺溶液。對于蛋白和淀粉含量豐富的樣本,應(yīng)再加1ml蛋白酶和淀粉酶溶液。再加3至5滴甲苯后,37℃孵育16小時,再轉(zhuǎn)入100ml容量瓶,加水定容,過濾。

 

之所以采取酶解法,是因為在一些食品中葉酸以蛋白結(jié)合的形式存在,以上提取方法是依據(jù)中國預(yù)防科學(xué)院食品與衛(wèi)生研究所對食品前提取方法進行的研究(2)。該研究還發(fā)現(xiàn),蔬菜樣品采用二次水解法效果比較好;葉酸在酸性和過堿性環(huán)境中破壞嚴重,因此樣品提取液和培養(yǎng)基pH值應(yīng)控制在6.8-7.2。

 

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參考文獻

1. 唐靚,等.國標(biāo)<食品中葉酸的測定>的標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制與計算.中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2009,19(7):

2.王竹. 樣品前處理對食物中葉酸測定的影響.衛(wèi)生研究. 2000, 29 (6):404-406

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