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幾種分離空腸彎曲菌的方法介紹

更新時(shí)間:2018-10-30  |  點(diǎn)擊率:1864

彎曲菌(Campylobacterspp.)是導(dǎo)致人類食源性腹瀉的主要病原菌之一,其感染已成為范圍內(nèi)引起細(xì)菌性腸胃炎的主要病因。目前,彎曲菌屬已被鑒定有26個(gè)種。

 

空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌是彎曲菌屬中引起大多數(shù)的人類疾病的主要菌種,由空腸彎曲菌引起超過90%人類疾病感染,除急性腸胃炎,其感染還可并發(fā)嚴(yán)重的格林-巴利綜合征,可導(dǎo)致人呼吸肌麻痹而死亡。剩余大多數(shù)人類疾病由結(jié)腸彎曲菌引起。

 

 

如何的檢測出空腸彎曲菌,成為了檢測人員關(guān)心的重要問題。本文締一生物為您介紹幾種空腸彎曲菌檢測方法。

 

傳統(tǒng)檢測方法

根據(jù)選擇性培養(yǎng)基生長特征、鏡檢和諸多生化指標(biāo)來判別。根據(jù) ISO10272-2017 方法和國標(biāo) GB 4789.9-2014 方法,空腸彎曲菌是能水解馬尿酸鹽的彎曲菌,并且是區(qū)分空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的生化指標(biāo)。一般步驟分樣品處理、增菌與預(yù)增菌、分離、鑒定四個(gè)步驟,菌種分離是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵問題。

 

分離空腸彎曲菌締一生物為您推薦使用HiMedia公司(微生物公司)彎曲菌顯色培養(yǎng)基(貨號(hào):M2020)進(jìn)行分離。常見的空腸彎曲菌分離平板為mCCDA,HiMedia在mCCDA平板上進(jìn)行改良,可支持彎曲桿菌的豐饒生長,在此培養(yǎng)基中呈現(xiàn)淺紫至紫色的菌落,比通常mCCDA平板容易分離,可對(duì)食品和臨床樣品對(duì)彎曲桿菌進(jìn)行選擇性分離和鑒定。

 

傳統(tǒng)檢測方法具有儀器、設(shè)備要求不高,檢測成本低等優(yōu)點(diǎn),目前仍是質(zhì)檢部門檢測彎曲菌的主要檢測方法。

 

免疫傳感器方法

生物傳感器是對(duì)生物物質(zhì)敏感并能將其濃度轉(zhuǎn)換為電信號(hào)等進(jìn)行檢測的儀器。它是由固定化的生物敏感材料作識(shí)別元件(包括酶、抗原、抗體、微生物、細(xì)胞、組織、核酸等生物活性物質(zhì))、信號(hào)轉(zhuǎn)換器(如氧電極、光敏管、場效應(yīng)管、壓電晶體等)及信號(hào)放大裝置構(gòu)成的分析工具或系統(tǒng)組成。待測物與識(shí)別元件發(fā)生作用后,所得產(chǎn)物(光、熱等)通過信號(hào)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變?yōu)榭梢暂敵龅碾娦盘?hào)、光信號(hào)等,從而達(dá)到分析檢測物的目的。

 

基于生物傳感器的方法自動(dòng)化程度高,對(duì)人員的要求不高,可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的現(xiàn)場實(shí)時(shí)無損檢測,但在食品基質(zhì)中的檢測效果一般。

 

基于質(zhì)譜的方法

 

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)是近年來發(fā)展起來的一種新型的用于微生物鑒定和分型的技術(shù)。其原理是用激光照射樣品與基質(zhì)形成的共結(jié)晶薄膜,基質(zhì)從激光中吸收能量,樣品解吸附,基質(zhì)-樣品之間發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移使得樣品分子電離,電離的樣品在電場作用下飛過真空飛行管,通過離子的質(zhì)量電荷之比(M/Z)與離子的飛行時(shí)間成正比來分析離子,并測得樣品分子的分子量。不同的細(xì)菌經(jīng)過 MALDI-TOF-MS 檢測可以形成特異性的指紋圖譜,將待測菌的指紋圖譜與已有的質(zhì)譜圖譜庫比較,即可確定細(xì)菌種屬。

 

基于質(zhì)譜的方法雖然快速可靠,但主要應(yīng)用于對(duì)純菌株的鑒定分型,要達(dá)到直接從樣品中分析彎曲菌菌種的目的,則需要調(diào)整試驗(yàn)策略建立一系列適合彎曲菌的重現(xiàn)性好的分析方法。

 

實(shí)時(shí)熒光 PCR 法

實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)是將傳統(tǒng)的 PCR 擴(kuò)增和檢測相結(jié)合,在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè) PCR 進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定性定量分析的方法。根據(jù)熒光標(biāo)記方法一般分為染料法和探針法。

 

與傳統(tǒng)的 PCR 相比,實(shí)時(shí)熒光 PCR 方法具有特異性更強(qiáng)、靈敏度更高、自動(dòng)化程度高、有效解決 PCR 污染問題等優(yōu)點(diǎn),在 21 世紀(jì)初已廣泛應(yīng)用于各種領(lǐng)域,包括彎曲菌等食源性致病菌的快速檢測中。但對(duì)人員的要求較高,也需特定的較為昂貴的儀器,使其在實(shí)際應(yīng)用中受限。

 

檢測空腸彎曲菌的方法很多,各有利弊,建立一個(gè)更快速簡便、更穩(wěn)定可靠、更準(zhǔn)確、更低成本的彎曲菌檢測技術(shù)是保證公共衛(wèi)生和食品安全的迫切需求??梢灶A(yù)見,多種檢測技術(shù)的有機(jī)結(jié)合和優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)有望解決上述需求。

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