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霍亂弧菌的分離與鑒定

更新時間:2018-11-13  |  點擊率:2262

霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一,屬于檢疫傳染病,曾在世界上引起多次大流行?;魜y弧菌是該病的病原體,學名V.cholera,屬弧菌科,是一種革蘭氏陰性菌。

 

 

人類在自然情況下是霍亂弧菌的主要易感者,通過污染的水源或飲食物經(jīng)口傳染。在一定條件下,霍亂弧菌進入小腸后,依靠鞭毛的運動,穿過粘膜表面的粘液層,可能藉菌毛作用粘附于腸壁上皮細胞上,在腸粘膜表面迅速繁殖,經(jīng)過短暫的潛伏期后便急驟發(fā)病。該菌不侵入腸上皮細胞和腸腺,也不侵入血流,僅在局部繁殖和產(chǎn)生霍亂腸毒素,此毒素作用于不粘膜上皮細胞與腸腺使腸液過度分泌,從而患者出現(xiàn)上吐下瀉,瀉出物呈“米泔水樣”并含大量弧菌,此為本病典型的特征。

 

霍亂弧菌分離與鑒定方法

 

生化鑒定

 

生化鑒定前,先分離霍亂弧菌,通常情況下,霍亂弧菌在TCBS培養(yǎng)基上典型霍亂弧菌菌落為黃色,扁平,真徑 2-3 mm;副溶血弧菌菌落呈圓形,邊緣整齊、濕潤、稍混濁、半透明,多數(shù)具尖心、斗笠狀,藍綠色菌落,直徑2-4 mm。

 

但傳統(tǒng)TCBS培養(yǎng)基上的其他的蔗糖發(fā)酵菌會影響TCBS瓊脂上弧菌的鑒定,影響檢測結(jié)果?;蜻x用顯色培養(yǎng)基分離,締一生物為您推薦HiMedia公司(微生物公司)的HiCrome弧菌顯色培養(yǎng)基(貨號:MV1682),在該培養(yǎng)基上細菌β-半乳糖苷酶和培養(yǎng)基中所包含底物發(fā)生反應,使霍亂弧菌呈現(xiàn)紫色菌落;同時可以分離出副溶血性弧菌,呈現(xiàn)藍綠色菌落,可初步確認副溶血性弧菌和霍亂弧菌的存在。

 

可選用HiMedia公司HiBio-IDTM弧菌生化鑒定卡(貨號:KB007), 12種生化反應:

1

伏普試驗

2

精氨酸脫羧試驗

3

鹽耐量試驗(1%)

4

ONPG試驗

5

檸檬酸鹽利用試驗

6

鳥氨酸脫羧試驗

7

甘露醇發(fā)酵試驗

8

阿拉伯糖發(fā)酵試驗

9

蔗糖發(fā)酵試驗

10

葡萄糖發(fā)酵試驗

11

水楊苷發(fā)酵試驗

12

纖維二糖發(fā)酵試驗

 

特點:

△操作簡單,省時省力

△省心,所需試劑都包含在試劑盒中

△率,一次孵育即出結(jié)果

△實驗結(jié)果準確、可靠

 

2.血清凝集法

 

   根據(jù)弧菌O抗原不同,分成Ⅵ個血清群,第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型:含AC者為原型(又稱稻葉型),含AB者為異型(又稱小川型),A、B、C均有者稱中間型(彥島型)。

 

  1992年10月在印度東南部又發(fā)現(xiàn)了一個引起霍亂流行的新血清型菌株(0139),它引起的霍亂在臨床表現(xiàn)及傳播方式上與古典型霍亂*相同,但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集,抗01群的抗血清對0139菌株無保護性免疫。在水中的存活時間較01群霍亂弧菌長,因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株。

 

3.核酸擴增法

 

  核酸擴增兩端,然后在體外模擬DNA體內(nèi)復制的過程反復擴增,使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。技術,即聚合酶鏈式反應(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是設計、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對應于待測病原微生物某一段特異性序列。

 

由霍亂弧菌引起的霍亂疾病,對人類健康危害很大,有效的檢測鑒定出霍亂弧菌對人類健康有著重要意義。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在微生物培養(yǎng)和檢測領域,一如既往地為您帶來的服務。

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