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方便雙歧桿菌計(jì)數(shù)的顯色培養(yǎng)基

更新時(shí)間:2019-05-08  |  點(diǎn)擊率:1607

近年來(lái),雙歧桿菌作為益生菌,越來(lái)越得到人們的重視。一方面,在生產(chǎn)中,需要進(jìn)行雙歧桿菌的培養(yǎng),另一方面,在酸乳等食品乳品中,又需要雙歧桿菌的計(jì)數(shù)。因?yàn)殡p歧桿菌只有活菌數(shù)達(dá)到10CFU/mL以上時(shí),才能發(fā)揮正常生理功能;數(shù)量太少,則達(dá)不到保健的效果。

 

在培養(yǎng)雙歧桿菌時(shí),需要了解雙歧桿菌為專性厭氧菌,適宜生長(zhǎng)的環(huán)境pH值為6.7~7.0。它為革蘭氏陽(yáng)性,無(wú)運(yùn)動(dòng)性,包括至少25個(gè)種,適合生長(zhǎng)溫度在25℃-45℃。雙歧桿菌對(duì)碳水化合物的代謝終產(chǎn)物為乳酸和醋酸。

 

雙歧桿菌原本可以作為指示菌,因?yàn)樗诩S便中出現(xiàn)的頻率非常高。有人研究發(fā)現(xiàn),嬰兒出生后母乳喂養(yǎng)一周,腸道中雙歧桿菌數(shù)可占92%,而健康成年人僅有10%。但雙歧桿菌生長(zhǎng)緩慢,且嚴(yán)格厭氧,培養(yǎng)很不方便,因此并沒(méi)有作為糞便的指示菌。

 

當(dāng)今食品發(fā)展的趨勢(shì)是,應(yīng)用雙歧桿菌越來(lái)越多,且乳桿菌與雙歧桿菌同時(shí)添加。這種混合發(fā)酵,多見(jiàn)于酸奶與保健品。在酸奶中,常應(yīng)用嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌在牛奶中發(fā)酵 , 以使產(chǎn)品具有酸奶特有的細(xì)膩圓潤(rùn)的凝乳狀態(tài)。而如果只單一使用雙歧桿菌發(fā)酵,則風(fēng)味與口感不佳。但混合發(fā)酵也帶來(lái)一個(gè)問(wèn)題,即給雙歧桿菌的計(jì)數(shù)帶來(lái)麻煩。一方面,雙歧桿菌與乳桿菌都屬于乳酸菌,性能接近,另一方面,雙歧桿菌隨著傳代次數(shù)增多,會(huì)發(fā)生變異成桿狀,因此通過(guò)鏡下形態(tài)鑒別不太可靠。如果能有一款商品化的雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基,則可給雙歧桿菌的鑒別和計(jì)數(shù)帶來(lái)極大的便捷。

 

世界微生物培養(yǎng)基生產(chǎn)商HiMedia開(kāi)發(fā)有一款雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基(品名:HiCrome™
Bifidobacterium Agar),它可用于雙歧桿菌與乳桿菌混合發(fā)酵的酸乳等制品菌落的鑒別計(jì)數(shù)。該顯色培養(yǎng)基中含有特別蛋白胨、牛奶蛋白、氯化鈉、顯色劑和瓊脂。牛奶蛋白能檢測(cè)雙歧桿菌的酪蛋白水解活性,從而使菌落表現(xiàn)出光暈。顯色劑則可鑒別乳桿菌和雙歧桿菌。乳桿菌屬通常表現(xiàn)為綠色菌落和霧狀背景(發(fā)酵乳桿菌例外,菌落為粉色,無(wú)光暈),雙歧桿菌則根據(jù)物種不同,菌落顏色也有所區(qū)別:嬰兒雙歧桿菌表現(xiàn)為深藍(lán)色至藍(lán)綠色菌落。短雙歧桿菌表現(xiàn)為粉紅色菌落,并且有光暈。據(jù)了解,雙歧桿菌在成人體內(nèi)的菌種主要是青春雙歧桿菌和長(zhǎng)雙歧桿菌。在嬰兒為嬰兒雙歧桿菌和短雙歧桿菌。

圖. 右上為嬰兒雙岐桿菌ATCC 25962,左上為短雙歧桿菌ATCC 15698,下為植物乳桿菌ATCC 8014

 

雙歧桿菌在許多制品以及人和動(dòng)物腸道內(nèi),大多與其他菌(如乳酸菌)混合生長(zhǎng),而且生長(zhǎng)特點(diǎn)相近,很難區(qū)分。要對(duì)其進(jìn)行計(jì)數(shù),需設(shè)計(jì)特定的選擇培養(yǎng)基。雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基一方面要求能保證雙歧桿菌的生長(zhǎng),同時(shí)要求選擇性高,對(duì)雜菌的抑制性強(qiáng),雙歧桿菌菌落呈現(xiàn)顯著的顏色或形態(tài)上的特征。傳統(tǒng)培養(yǎng)雙歧桿菌培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),需要 96小時(shí)才能出結(jié)果,而該顯色培養(yǎng)基則只需在無(wú)氧條件下35-37℃孵育48小時(shí),即可知道準(zhǔn)確結(jié)果。顯色培養(yǎng)方法的特異性也很高,能夠保證培養(yǎng)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

 

HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基能快速有效地檢測(cè)雙歧桿菌,這對(duì)于辨別產(chǎn)品中添加雙歧桿菌的數(shù)量具有重要意義。HiCrome™
雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基能實(shí)現(xiàn)一步培養(yǎng)直接計(jì)數(shù),基本能夠滿足實(shí)驗(yàn)室對(duì)雙歧桿菌初步檢測(cè)計(jì)數(shù)的需要,特別適合不擁有大型細(xì)菌鑒定儀的中小企業(yè)和第三方實(shí)驗(yàn)室。

 

 

圖. 短雙歧桿菌

 

 

圖. 植物乳桿菌

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