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細(xì)胞培養(yǎng)前期都需要準(zhǔn)備什么

更新時(shí)間:2020-04-21  |  點(diǎn)擊率:954

今天分享實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)人員的培養(yǎng)細(xì)胞的心得,希望給做細(xì)胞培養(yǎng)新手啟發(fā)。怎么才能培養(yǎng)出符合條件的細(xì)胞呢?

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1、選擇正確的培養(yǎng)基

在養(yǎng)細(xì)胞之前,就要了解,你所養(yǎng)細(xì)胞的來(lái)源以及種類和名稱,查閱一定量的文獻(xiàn),確定所需培養(yǎng)液種類以及是否需要添加特殊成分,常用的細(xì)胞培養(yǎng)液有DMEM、RPMI1640、F12等等,一些常見(jiàn)的細(xì)胞基本可以使用這幾種培養(yǎng)基中的一種來(lái)培養(yǎng),有的需要加入一定其他成分,這需要根據(jù)不同的細(xì)胞類型,查ATCC細(xì)胞庫(kù)或者查文獻(xiàn),才能找到所需的培養(yǎng)液。選擇正確的培養(yǎng)液是養(yǎng)好細(xì)胞的一步。

 

2、了解細(xì)胞的生長(zhǎng)習(xí)性

不同的細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性不同。如成纖維細(xì)胞是貼壁生長(zhǎng),有一定的密度依賴性,密度小可能會(huì)出現(xiàn)不增殖,狀態(tài)差的情況,接種密度大時(shí)則需要隔天傳代,頻繁傳代則影響細(xì)胞狀態(tài);再如RPMI-8226人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞,是懸浮生長(zhǎng)的,傳代需離心棄去上清即可??傊?,了解細(xì)胞生長(zhǎng)習(xí)性,再加上正確的計(jì)數(shù),才能掌握好傳代的密度。

 

3、選擇優(yōu)質(zhì)的血清

血清中含有細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的生長(zhǎng)因子,作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的附加物,血清的添加是十分重要的,因此,選擇優(yōu)質(zhì)的血清,是細(xì)胞養(yǎng)殖成功與否的關(guān)鍵!

 

4、及時(shí)傳代和更換培養(yǎng)液

在細(xì)胞增殖到一定的密度后,要及時(shí)傳代,根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和密度,及時(shí)更換培養(yǎng)液。更換過(guò)勤,浪費(fèi)培養(yǎng)液,更換不夠及時(shí),則細(xì)胞狀態(tài)轉(zhuǎn)差,一般需隔天更換培養(yǎng)液,具體可根據(jù)所養(yǎng)細(xì)胞種類予以調(diào)整。

 

5、的無(wú)菌意識(shí)

前面林林總總?cè)慷甲⒁夂昧?,如果無(wú)菌意識(shí)差,細(xì)胞中混入了微生物,則千里之堤潰于蟻穴,細(xì)菌的生長(zhǎng)速度和破壞力,將迅速占領(lǐng)培養(yǎng)皿,破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu),有些初學(xué)者會(huì)在培養(yǎng)液中加入1%的雙抗,但是,無(wú)菌意識(shí)不強(qiáng),雙抗亦無(wú)法拯救你的細(xì)胞!

 

6、傾心的呵護(hù),頻繁的觀察

做到以上幾點(diǎn),就可以開(kāi)始養(yǎng)你的細(xì)胞了,但是再次重申細(xì)胞嬌弱,在養(yǎng)細(xì)胞的過(guò)程中,難免會(huì)出現(xiàn)一些意想不到的問(wèn)題,要想成功養(yǎng)好細(xì)胞,時(shí)時(shí)惦記它 ,頻繁地觀察,初期一天觀察2次都不足為過(guò),出現(xiàn)任何預(yù)料外的情況,及時(shí)處理,才能保障收獲一盤(pán)“漂亮”的細(xì)胞。

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