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牛血清外源因子檢查內(nèi)容

更新時(shí)間:2020-08-06  |  點(diǎn)擊率:793

牛血清富含細(xì)胞生長必要的因子,但牛血清在生產(chǎn)制作中也存在引入外源因子的風(fēng)險(xiǎn)。所以在遵循牛血清生產(chǎn)的GMP規(guī)范也要對其做全面的質(zhì)控檢測。

外源因子主要包括微生物、內(nèi)毒素和病毒抗體等。

01、微生物

1. 細(xì)菌和真菌

其中細(xì)菌又分為需氧菌和厭氧菌。

這兩種微生物的檢查又稱為無菌檢查?,F(xiàn)多采用培養(yǎng)法。我國藥典通則1101和美國藥典USP<71>有關(guān)于無菌檢查方法的說明。

牛血清在生產(chǎn)過程中,經(jīng)0.22mm孔徑的濾膜過濾,可*祛除細(xì)菌和真菌,因其大小>1mm。

2. 支原體

支原體大小介于0.1mm~0.3mm

牛血清在生產(chǎn)過程中,經(jīng)0.1mm孔徑的濾膜三次過濾,可*祛除支原體。

支原體檢查也采用培養(yǎng)法,可參看我國藥典通則3301和美國藥典USP<63>

3. 病毒

病毒檢查包括細(xì)胞培養(yǎng)法及熒光抗體檢測。細(xì)胞培養(yǎng)法包括細(xì)胞病變效應(yīng)和血吸附檢查。檢測多為導(dǎo)致牛常見傳染病的病毒,如牛副流感病毒型(PI3)、牛腺病毒(BAV-3 ) 、牛細(xì)小病毒(BPV ) 以及牛病毒性腹瀉病毒(BVD)等。其中,BVD以其發(fā)病率高,亞型不具有細(xì)胞病變效應(yīng)而尤其受到重視。

 

02、內(nèi)毒素

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分,主要為脂多糖。內(nèi)毒素對細(xì)胞產(chǎn)生刺激,直接導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,因此內(nèi)毒素被用來進(jìn)行血清評級。特級胎牛血清內(nèi)毒素要求≤10EU/ml。但內(nèi)毒素濃度越低越好,尤其是對于一些嬌氣的細(xì)胞。

內(nèi)毒素的檢測是采用鱟試劑法。

 

03、病毒抗體

動物感染病毒后,會刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。感染治愈后,抗體會長期存在。病毒抗體會影響疫苗細(xì)胞苗的毒價(jià)。如豬瘟細(xì)胞苗的生產(chǎn),就不能用含BVD抗體的牛血清,因該抗體與豬瘟病毒抗原之間會發(fā)生特異性交叉反應(yīng)。2020版中國藥典也規(guī)定用于乙腦疫苗生產(chǎn)的新生牛血清,應(yīng)為乙腦抗體陰性。

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