国产免费观看久久黄av片,亚洲人成网站观看在线播放 ,精品一区二区三区四区五区六区,国产农村妇女毛片精品久久

當前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  支原體標準品的品控是保證質(zhì)量的關(guān)鍵

支原體標準品的品控是保證質(zhì)量的關(guān)鍵

更新時間:2020-11-25  |  點擊率:808

生物制品和細胞治療企業(yè)已越來越多地采用核酸法進行支原體的檢查和生產(chǎn)質(zhì)控。核酸法如替代藥典方法,則需進行方法驗證。

現(xiàn)在一些地方在使用德國MB公司的支原體標準品或支原體基因組DNA(定量標準品),包括靈敏度標準品(10CFU,100CFU)、特異性標準品以及PCR定量標準品,其中靈敏度標準品也可用于耐用性的驗證。

MB廠家具有ISO 9001和ISO 13485質(zhì)量體系認證。每個批次支原體標準品都有驗證和質(zhì)控。同時支原體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基每個批次都符合歐洲藥品質(zhì)量管理局(EDQM)的標準。標準品每個批次都提供有質(zhì)控證書(COA)。標準品所用的支原體菌株來自英國NCTC菌種保藏中心,同時具有相應(yīng)的ATCC編號。

下面對MB廠家的三類標準品的質(zhì)控方面做一介紹。

(一)支原體靈敏度標準品

10CFU支原體靈敏度標準品為滅活支原體,這樣不會對實驗室造成支原體污染。它用于核酸法的靈敏度和耐用性驗證。它每盒含3管10CFU支原體凍干粉,2管陰性對照。靈敏度標準品主要經(jīng)過下列三方面的質(zhì)控:

 

1. 功能檢測:

即標準品復(fù)溶后作DNA抽提(采用MB公司的Venor®GeM Sample Preparation Kit),再用符合藥典標準的qPCR試劑盒檢測,應(yīng)保證有擴增曲線。

2. 活力檢測:

即標準品在培養(yǎng)基中復(fù)溶并培養(yǎng)7天后,再進行DNA抽提和qPCR檢測,Ct值和對照組比,應(yīng)不超過允許閾值(ΔCt >2)。該檢測主要是確保支原體均已滅活。

3.di閾限檢測和批次合格標準:

標準品用DMEM+5%FCS進行10倍梯度稀釋,形成3個稀釋度,DNA抽提后然后進行前后3輪qPCR檢測,每輪每個稀釋度重復(fù)8次。每種支原體的Ct平均值應(yīng)達到一定標準,方為合格。

(二)支原體基因組DNA——特異性驗證用

該基因組DNA是從相應(yīng)的支原體中抽提出來,并制成凍干粉。每管為10ng左右。復(fù)溶時,每管加100ml廠家提供的Tris緩沖液,室溫靜置5分鐘,再渦旋離心5秒鐘。

廠家對基因組中的16S rRNA段進行了序列分析,要求應(yīng)與相應(yīng)支原體物種的同源性應(yīng)達到99%以上。對制備的DNA質(zhì)量和數(shù)量進行了熒光分析和PCR擴增。PCR擴增應(yīng)顯示為單一的擴增條帶。

(三)PCR定量標準品

每管為1x108拷貝的支原體物種基因組DNA凍干粉,使用時也是先用廠家提供的Tris緩沖液復(fù)溶。質(zhì)控時,對16S rRNA的部分序列進行測序分析,以鑒定支原體物種,測序結(jié)果應(yīng)顯示為99%以上的同源性。再對該標準品作系列梯度稀釋,再進行qPCR擴增,應(yīng)顯示為良好的線性。該方法還可確定qPCR方法的檢測閾值。

MB公司的上述三類標準品可用于對支原體核酸法的方法學(xué)驗證,包括靈敏度、特異性和耐用性。其中,基因組DNA除了包括常見支原體物種外,還包括一些常見細菌,用于驗證常規(guī)PCR或qPCR的檢測是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)。

總之,良好的質(zhì)控是標準品品質(zhì)的保證,這樣才能確保方法驗證結(jié)果的可靠性,使支原體的核酸法檢測符合藥典所規(guī)定的標準,從而為替代培養(yǎng)法等經(jīng)典支原體的檢測方法提供數(shù)據(jù)支持。

 

感謝締一生物提供相關(guān)內(nèi)容

成人国产经典视频在线观看| 公和我做好爽添厨房在线观看| 日本aaaaa级特黄大片 | 中文字幕在线看成电影乱码| 瑜伽裤国产一区二区三区| 不戴套挺进人妻怀孕| 真实单亲乱l仑对白视频| 免费无码黄十八禁网站在线观看| 亚洲综合色自拍一区| 精品人妻av区波多野结衣| 亚洲精品无码成人A片在线| 亚洲爆乳精品无码一区二区三区| 国产 在线 | 日韩| 毛片亚洲AV无码精品国产午夜| 国产丰满成熟女人性满足视频| 办公室秘书无码激情AV| 最近2019中文字幕大全视频1| 欧美精品色情特级a片| 阳茎伸入女人阳道视频免费| 97免费人妻在线视频| 丰满少妇被粗大猛烈进人高清| 亚洲av无码av吞精久久| 亚洲av午夜福利精品一区| 果冻传媒剧国产剧在线看| 欧美日韩精品一区二区在线播放| 亚洲欧美在线观看| 久久人妻少妇嫩草AV蜜桃| 国模吧无码一区二区三区| 特黄做受又硬又粗又大视频18| 亚洲欧洲日产v| 交换年轻的少妇在线观看| 电梯里吸乳挺进我的身体视频| 亚洲国产精品久久久久秋霞小 | 一本大道伊人av久久综合| 色综合久久精品亚洲国产| 久久婷五月丁香色啪网| 最美情侣中文字幕电影| 亚洲午夜av久久久精品影院| 亚洲国产天堂久久综合| 强奷漂亮少妇高潮A片| 狠狠色噜噜狠狠狠888米奇视频|