国产免费观看久久黄av片,亚洲人成网站观看在线播放 ,精品一区二区三区四区五区六区,国产农村妇女毛片精品久久

當前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  支原體標準品的品控是保證質(zhì)量的關(guān)鍵

支原體標準品的品控是保證質(zhì)量的關(guān)鍵

更新時間:2020-11-25  |  點擊率:808

生物制品和細胞治療企業(yè)已越來越多地采用核酸法進行支原體的檢查和生產(chǎn)質(zhì)控。核酸法如替代藥典方法,則需進行方法驗證。

現(xiàn)在一些地方在使用德國MB公司的支原體標準品或支原體基因組DNA(定量標準品),包括靈敏度標準品(10CFU,100CFU)、特異性標準品以及PCR定量標準品,其中靈敏度標準品也可用于耐用性的驗證。

MB廠家具有ISO 9001和ISO 13485質(zhì)量體系認證。每個批次支原體標準品都有驗證和質(zhì)控。同時支原體培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基每個批次都符合歐洲藥品質(zhì)量管理局(EDQM)的標準。標準品每個批次都提供有質(zhì)控證書(COA)。標準品所用的支原體菌株來自英國NCTC菌種保藏中心,同時具有相應(yīng)的ATCC編號。

下面對MB廠家的三類標準品的質(zhì)控方面做一介紹。

(一)支原體靈敏度標準品

10CFU支原體靈敏度標準品為滅活支原體,這樣不會對實驗室造成支原體污染。它用于核酸法的靈敏度和耐用性驗證。它每盒含3管10CFU支原體凍干粉,2管陰性對照。靈敏度標準品主要經(jīng)過下列三方面的質(zhì)控:

 

1. 功能檢測:

即標準品復(fù)溶后作DNA抽提(采用MB公司的Venor®GeM Sample Preparation Kit),再用符合藥典標準的qPCR試劑盒檢測,應(yīng)保證有擴增曲線。

2. 活力檢測:

即標準品在培養(yǎng)基中復(fù)溶并培養(yǎng)7天后,再進行DNA抽提和qPCR檢測,Ct值和對照組比,應(yīng)不超過允許閾值(ΔCt >2)。該檢測主要是確保支原體均已滅活。

3.di閾限檢測和批次合格標準:

標準品用DMEM+5%FCS進行10倍梯度稀釋,形成3個稀釋度,DNA抽提后然后進行前后3輪qPCR檢測,每輪每個稀釋度重復(fù)8次。每種支原體的Ct平均值應(yīng)達到一定標準,方為合格。

(二)支原體基因組DNA——特異性驗證用

該基因組DNA是從相應(yīng)的支原體中抽提出來,并制成凍干粉。每管為10ng左右。復(fù)溶時,每管加100ml廠家提供的Tris緩沖液,室溫靜置5分鐘,再渦旋離心5秒鐘。

廠家對基因組中的16S rRNA段進行了序列分析,要求應(yīng)與相應(yīng)支原體物種的同源性應(yīng)達到99%以上。對制備的DNA質(zhì)量和數(shù)量進行了熒光分析和PCR擴增。PCR擴增應(yīng)顯示為單一的擴增條帶。

(三)PCR定量標準品

每管為1x108拷貝的支原體物種基因組DNA凍干粉,使用時也是先用廠家提供的Tris緩沖液復(fù)溶。質(zhì)控時,對16S rRNA的部分序列進行測序分析,以鑒定支原體物種,測序結(jié)果應(yīng)顯示為99%以上的同源性。再對該標準品作系列梯度稀釋,再進行qPCR擴增,應(yīng)顯示為良好的線性。該方法還可確定qPCR方法的檢測閾值。

MB公司的上述三類標準品可用于對支原體核酸法的方法學(xué)驗證,包括靈敏度、特異性和耐用性。其中,基因組DNA除了包括常見支原體物種外,還包括一些常見細菌,用于驗證常規(guī)PCR或qPCR的檢測是否會產(chǎn)生交叉反應(yīng)。

總之,良好的質(zhì)控是標準品品質(zhì)的保證,這樣才能確保方法驗證結(jié)果的可靠性,使支原體的核酸法檢測符合藥典所規(guī)定的標準,從而為替代培養(yǎng)法等經(jīng)典支原體的檢測方法提供數(shù)據(jù)支持。

 

感謝締一生物提供相關(guān)內(nèi)容

善良的小峓子hd完整视频中文| 777色婷婷AV一区二区三| 丰满肥臀大屁股熟妇激情视频| 中文字幕乱码人妻一区二区三区 | 国产精品国产三级在线专区 | 亚洲精品国产综合久久久久紧| 亚洲欧美日韩久久精品第一区 | 久久精品国产精品亚洲| 国产清纯女高中生被C| 无码欧美熟妇人妻影院欧美潘金莲 | 国产一区二区精品久久岳| 四川少妇bbw搡bbbb槡bbbb| 日日噜噜夜夜狠狠va视频| 久久久久人妻一区二区三区| 国产成人18黄网站在线观看软件| 免费播放作爱视频| 艳鉧动漫1~6全集观看旧里| 伊人天堂av无码av日韩av| 日本最大但人文艺术第一组| 麻豆传煤入口免费进入2023| 麻豆国产精品番甜甜七夕| 国产麻豆精品一区二区三区V视界| 国产人妖XXXX做受视频| 永久免费的啪啪免费网址| 成 人 网 站94免费观看| 精品国产一区二区三区av| 最近中文字幕高清中文字幕2018 | 亚洲欧美日本韩国| 亚洲日韩欧美一区二区三区| 久久国产欧美日韩精品| 东北粗口国产床| 久久人人添人人爽添人人片牛牛| 亚洲精品久久无码| 最近中文字幕大全| 亚洲成av人综合在线观看| 光棍天堂手机2019版免费观看| 99久无码中文字幕一本久道 | 一起洗澡的老师免费播放| 国产精品无码久久久久| 久久av高潮av无码av| 粗了大了 整进去好爽视频|