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培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)該如何進(jìn)行細(xì)菌檢測(cè)

更新時(shí)間:2021-04-28  |  點(diǎn)擊率:768

細(xì)胞培養(yǎng)是生物醫(yī)學(xué)研究的常見(jiàn)操作,其中避免細(xì)菌污染是重要一環(huán)。對(duì)于生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室,早期就檢查培養(yǎng)細(xì)胞中是否存在細(xì)菌污染,對(duì)于解決細(xì)胞污染問(wèn)題,是一個(gè)合理的選擇。

 

據(jù)估計(jì),高達(dá)5%的細(xì)胞培養(yǎng)物發(fā)生過(guò)細(xì)菌污染,并且缺乏肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌污染跡象,如渾濁、培養(yǎng)基突然變色(酚紅)或出現(xiàn)微生物顆粒。此外,細(xì)菌可對(duì)標(biāo)準(zhǔn)抗生素(如青霉素/鏈霉素)表現(xiàn)出耐藥性,并直接影響細(xì)胞代謝、生長(zhǎng)和分化。因此,采用一款快速、靈敏、可靠的細(xì)菌檢測(cè)試劑盒,就顯得尤為必要。

 

 

 

德國(guó)MB公司專門設(shè)計(jì)的細(xì)菌PCR檢測(cè)Kit可以直接檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)衍生的生物制劑和細(xì)胞培養(yǎng)基中的細(xì)菌污染。下面小編介紹一下。

 

一、產(chǎn)品信息

 

二、產(chǎn)品描述

該試劑盒采用PCR方法,用于檢測(cè)生物樣品(包括細(xì)胞培養(yǎng)物和病毒貯存液)中是否存在細(xì)菌。

 

該試劑盒針對(duì)細(xì)菌16S rRNA基因高度保守區(qū)。根據(jù)序列一致性,可至少檢測(cè)污染細(xì)胞常見(jiàn)的45種細(xì)菌屬,具體如下:

放線菌Actinomyces

芽孢桿菌Bacillus

腸球菌Enterococcus

埃希氏桿菌Escherichia

梭菌Fusobacterium

克雷伯氏菌Klebsiella

乳酸桿菌Lactobacillus

微球菌Micrococcus

分枝桿菌Mycobacterium

假單胞菌Pseudomonas

卟啉單胞菌Porphyromonas

普氏菌Prevotella

沙門氏菌Salmonella

沙雷氏菌Serratia

軍團(tuán)菌Legionella

葡萄球菌Staphylococcus

鏈球菌Streptococcus

消化鏈球菌Peptostreptococcus

 

該試劑盒靈敏度達(dá)到100個(gè)基因組拷貝/PCR反應(yīng)。

說(shuō)明:該試劑盒只用于科研,不用于工業(yè)QC。

 

三、試劑盒包括:

凍干型PCR mix:含引物/核苷酸/內(nèi)控對(duì)照DNA /熱啟動(dòng)聚合酶;

復(fù)溶緩沖液;

凍干型陽(yáng)性對(duì)照DNA;

PCR級(jí)水。

 

四、樣本處理

樣本不用提DNA,只需熱滅活(95 °C 5分鐘);

樣本需不含抗生素,如含抗生素,則細(xì)胞應(yīng)在不含抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)至少一代后再檢測(cè)。

 

五、反應(yīng)體系

25μl反應(yīng)體系:含20 μl PCR Mix和5μl模板。

 

六、結(jié)果判定

PCR結(jié)束后在瓊脂糖電泳上跑膠。典型結(jié)果如下圖所示。

 

圖. 電泳分析結(jié)果。左側(cè)為內(nèi)控對(duì)照條帶,在140bp,用于排除假陰性。如有內(nèi)控條帶,則顯示PCR反應(yīng)正常,樣本中無(wú)PCR抑制成分。右側(cè)為目的條帶,在467bp左右。如有目的條帶,則提示有細(xì)菌污染。

 

七、產(chǎn)品引用文獻(xiàn)

Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.

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