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細胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù)

更新時間:2021-11-17  |  點擊率:694

現(xiàn)代生物技術(shù)一般認為包括基因工程技術(shù)、細胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細胞培養(yǎng)來實現(xiàn)的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細胞作為載體;細胞工程中更是離不細胞培養(yǎng),雜交瘤單克隆抗體,*是通過細胞培養(yǎng)來實現(xiàn)的,既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細胞培養(yǎng)。正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經(jīng)過細胞培養(yǎng)過程才能實現(xiàn),發(fā)酵工程和酶工程有的也與細胞培養(yǎng)密切相關(guān)??傊毎囵B(yǎng)在整個生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起到了很關(guān)鍵的核心作用。

第一節(jié) 體外培養(yǎng)的概念

一、基本概念 體外培養(yǎng)(in vitro culture),就是將活體結(jié)構(gòu)成分或活的個體從體內(nèi)或其寄生體內(nèi)取出,放在類似于體內(nèi)生存環(huán)境的體外環(huán)境中,讓其生長和發(fā)育的方法。

組織培養(yǎng):是指從生物體內(nèi)取出活的組織(多指組織塊)在體外進行培養(yǎng)的方法。

細胞培養(yǎng):是指將活細胞(尤其是分散的細胞)在體外進行培養(yǎng)的方法。

器官培養(yǎng):是指從生物體內(nèi)取出的器官(一般是胚胎器官)、器官的一部分或器官原基在體外進行培養(yǎng)的方法。

二、體內(nèi)、外細胞的差異和分化

1、差異:細胞離體后,失去了神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)和細胞間的相互影響,生活在缺乏動態(tài)平衡相對穩(wěn)定環(huán)境中,日久天長,易發(fā)生如下變化:分化現(xiàn)象減弱;形態(tài)功能趨于單一化或生存一定時間后衰退死亡;或發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得不死性,變成可無限生長的連續(xù)細胞系或惡性細胞系。因此,培養(yǎng)中的細胞可視為一種在特定的條件下的細胞群體,它們既保持著與體內(nèi)細胞相同的基本結(jié)構(gòu)和功能,也有一些不同于體內(nèi)細胞的性狀。實際上從細胞一旦被置于體外培養(yǎng)后,這種差異就開始發(fā)生了。

2、分化:體外培養(yǎng)的細胞分化能力并未*喪失,只是環(huán)境的改變,細胞分化的表現(xiàn)和在體內(nèi)不同。細胞是否表現(xiàn)分化,關(guān)鍵在于是否存在使細胞分化的條件,如Friend細胞(小鼠紅白血病細胞)在一定的因素作用下可以合成血紅蛋白,血管內(nèi)皮細胞在類似基膜物質(zhì)底物上培養(yǎng)時能長成血管狀結(jié)構(gòu),雜交瘤細胞能產(chǎn)生特異的單克隆抗體,這些均屬于細胞分化行為。

科研實驗中,細胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細胞,如:干細胞、肝細胞,神經(jīng)細胞,原代培養(yǎng)、細胞融合、轉(zhuǎn)染細胞等。

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