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實驗室被支原體污染后如何處理

更新時間:2022-01-29  |  點擊率:848

細胞培養(yǎng)過程中,支原體感染發(fā)生率達到63%,因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。當(dāng)細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變,而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響,因而細胞被支原體污染一般難以察覺。

后果

細胞株若受到細菌、真菌、支原體、或是特定病毒等之污染時,會嚴重的影響實驗的結(jié)果。而細菌、真菌等之微生物污染時,較易自培養(yǎng)基等的外觀變化察覺。但是若受到支原體之污染時,細胞之外觀較無明顯變化,但是其污染會造成細胞之生長速率緩慢、細胞產(chǎn)生病變之型態(tài)改變等等變化。

高污染率原因

1、支原體size 0.1~0.8 um,無細胞壁,可透過一般過濾膜(0.22-0.45 um)

2、支原體污染時,沒有明顯的肉眼或一般光學(xué)顯微鏡可觀察到的特征變化

3、過去缺乏簡單、快速且可靠的檢測方式

4、細胞流通間缺乏品管,造成實驗室間的相互污染

5、研究或操作人員忽略污染問題

對于低流行地區(qū),PCR檢測人員經(jīng)過嚴格培訓(xùn)上崗后,核酸污染的風(fēng)險相對較小,但在疫區(qū)超負荷工作時,就可能會遇到核酸污染的問題,可通過以下措施降低污染機會:
  1.正確佩戴手套:手套未緊密貼合拇指、食指和中指,在進行開蓋操作時容易發(fā)生交叉污染。
  2.正確使用生物安全柜:簡單、整潔、避免通風(fēng)口堵塞;操作前后紫外線照射,消毒劑隨手可及;廢液缸里有1/3體積的含氯消毒液,并且及時清理廢液缸,保證廢物不超過廢液缸體積的2/3。
  3.核酸提取儀去污染:每天多批次檢測時,在每一批次檢測完以后必須用75%的乙醇和核酸去除劑對儀器進行去污染。
  4.重視通風(fēng):不定期對房間進行通風(fēng),每次至少持續(xù)30min。
  5.PCR擴增區(qū)去污染:PCR反應(yīng)管必須蓋緊,避免擴增后的核酸對環(huán)境的污染。
  6.實驗室隨手可及的消毒劑。

有沒有什么方法能夠簡單高效地祛除DNA污染呢?

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當(dāng)然有:Minerva Biolabs PCR Clean™

通過中和以及降解的原理,可快速有效地祛除任何物體表面的DNA、RNA以及DNA酶、RNA酶的污染,使它們快速的降解,從而確保PCR實驗結(jié)果的準確。

使用方法也十分簡單:

將PCR Clean™噴在操作臺表面,反應(yīng)1分鐘后,即可用干凈紙巾擦干試劑。

注:如果沒有擦拭干凈,液體揮發(fā)后表面可能有白色殘留,影響美觀。此時可用噴壺噴灑蒸餾水到白色殘留處,然后擦拭即可。

針對移液器需要去除DNA污染,可按照說明書拆開移液器,將桿軸浸泡在PCR Clean™噴霧劑中,1分鐘后取出后用水沖洗,晾干,重新組合。

PCR Clean™的優(yōu)點:

1、快速:1分鐘起效。

2、方便:噴霧劑可直接使用。

3、保護實驗人員,避免接觸DNA污染。

4、穩(wěn)定性強:PCR Clean™耐熱,可在室溫保存至少一年。低溫可能會形成沉淀,但在37℃迅速溶解。即使在65°C條件下存放兩周,也不會影響噴霧劑的祛除效果。

5、成分安全:PCR Clean™含有少量的磷酸和乙氧基醇,成分非堿性,無致癌性。


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