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支原體qPCR檢測的儀器設(shè)置和注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-12-28  |  點(diǎn)擊率:789

目前在市場上,有一款支原體qPCR檢測試劑盒(英文品名:Venor®Gem qEP,廠家:德國MB) 廣受藥廠的歡迎。

該試劑盒經(jīng)過全面的方法學(xué)驗(yàn)證,符合歐洲藥典和日本藥典要求,適合細(xì)胞治療、CAR-T、抗體藥、疫苗等藥廠的過程控制、放行檢測以及臨床申報(bào)。要用好該試劑盒,除了嚴(yán)格遵循說明書的操作外,還有些注意事項(xiàng),下面小編向您介紹一下。

一、儀器的設(shè)置

要注意你所用的qPCR儀有幾個(gè)通道,是否可檢測相應(yīng)的熒光素。

MB的支原體qPCR檢測試劑盒(英文名:Venor®Gem qEP)適用的熒光定量PCR儀的機(jī)型廣泛,相關(guān)設(shè)置可從締一生物網(wǎng)站下載。


二、基線設(shè)置

許多qPCR儀軟件有自動(dòng)基線設(shè)置功能。

但要注意,有時(shí)也需要查看原始熒光數(shù)據(jù),了解各個(gè)樣本的基線水平。

如下圖圖1,有一些樣本的基線水平較高,就提示這些樣本可能存在一定的數(shù)據(jù)偏差或操作錯(cuò)誤。

圖1. 基線校正前的曲線

三、閾值設(shè)置

許多qPCR儀軟件有自動(dòng)閾值設(shè)置功能。但也應(yīng)關(guān)注一下,儀器自動(dòng)設(shè)定的閾值線是否合適。這需要一定的經(jīng)驗(yàn)。

如果閾值設(shè)定太低,會(huì)使靈敏度**化,增加假陽性的可能;

如果閾值設(shè)定太高,可能會(huì)影響靈敏度并導(dǎo)致假陰性。

圖2和圖3就是一個(gè)例子。

圖2. ABI 7500自動(dòng)閾值的設(shè)定。

圖3. ABI 7500手動(dòng)閾值的設(shè)定(熒光**值的5%)

在圖2中,有2個(gè)樣本為支原體陽性(黃線和紅線)。

在圖3中,這2個(gè)樣本中有一個(gè)變?yōu)殛幮粤耍t線)。

總之,閾值設(shè)定,如果是軟件自動(dòng)設(shè)置,應(yīng)再看一下閾值線的位置是否合適。必要時(shí)可進(jìn)行手動(dòng)設(shè)置。


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