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LAMP技術(shù)在支原體檢測(cè)中的優(yōu)缺點(diǎn)

更新時(shí)間:2023-08-13  |  點(diǎn)擊率:731

近年來,qPCR檢測(cè)技術(shù),以及環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)技術(shù),作為一種新興的核酸擴(kuò)增方法,在支原體臨床檢測(cè)中顯示出了巨大的潛力。

LAMP技術(shù)作為一種等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),與傳統(tǒng)的PCR方法相比,不需要復(fù)雜的溫度循環(huán),只需要穩(wěn)定的恒溫環(huán)境即可實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增。這使得LAMP技術(shù)在臨床實(shí)驗(yàn)室和野外條件下都具備廣泛應(yīng)用的可能性。LAMP技術(shù)(環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增)在支原體檢測(cè)中具有一些優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn),下面分別進(jìn)行詳細(xì)介紹:

優(yōu)點(diǎn):

快速擴(kuò)增: LAMP技術(shù)采用等溫條件,不需要復(fù)雜的溫度循環(huán),因此擴(kuò)增速度較快,通??梢栽?span>30分鐘到1小時(shí)內(nèi)完成,比傳統(tǒng)PCR更迅速。

高特異性: LAMP技術(shù)在引物設(shè)計(jì)上采用多個(gè)特異性引物,結(jié)合復(fù)雜的擴(kuò)增動(dòng)力學(xué),提供了較高的特異性,能夠準(zhǔn)確地區(qū)分目標(biāo)支原體序列。

設(shè)備簡單: LAMP反應(yīng)只需要一個(gè)穩(wěn)定的恒溫環(huán)境,例如恒溫水浴或熱擬溫器,不需要復(fù)雜的溫度控制設(shè)備,降低了實(shí)驗(yàn)的技術(shù)和設(shè)備門檻。

結(jié)果可視化: LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物通常形成可肉眼觀察的渾濁沉淀物,有助于直接觀察擴(kuò)增結(jié)果。此外,可以通過添加熒光染料或指示劑,實(shí)現(xiàn)產(chǎn)物的熒光可視化,進(jìn)一步提高結(jié)果分析的便捷性。

適用于野外應(yīng)用: LAMP技術(shù)在野外環(huán)境中也能夠?qū)嵤?,因?yàn)樗恍枰粋€(gè)恒溫環(huán)境,適用于一些需要快速診斷的場(chǎng)景,如偏遠(yuǎn)地區(qū)或?yàn)?zāi)害現(xiàn)場(chǎng)。

缺點(diǎn):

復(fù)雜的引物設(shè)計(jì): LAMP技術(shù)需要設(shè)計(jì)多個(gè)引物,包括外部引物、內(nèi)部引物和環(huán)引物,引物設(shè)計(jì)較為復(fù)雜,需要耗費(fèi)一定的時(shí)間和資源。

產(chǎn)物結(jié)構(gòu)復(fù)雜: LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物呈現(xiàn)出高度分支的簇環(huán)結(jié)構(gòu),這種結(jié)構(gòu)可能對(duì)產(chǎn)物的純化和后續(xù)分析造成一些挑戰(zhàn)。

不適用于大片段擴(kuò)增: LAMP技術(shù)相對(duì)適用于短片段的核酸擴(kuò)增,不太適用于較長片段的擴(kuò)增,這一點(diǎn)與傳統(tǒng)PCR方法不同。

定量困難: LAMP技術(shù)的產(chǎn)物數(shù)量與起始模板數(shù)量之間的線性關(guān)系可能較差,因此在定量方面存在一定的局限性。

部分產(chǎn)物難以區(qū)分: LAMP反應(yīng)產(chǎn)物包括多個(gè)簇環(huán)結(jié)構(gòu),其中有些結(jié)構(gòu)可能與非特異性產(chǎn)物難以區(qū)分,可能對(duì)結(jié)果解釋帶來困擾。

綜上所述,LAMP技術(shù)在支原體檢測(cè)中具有快速、高特異性、設(shè)備要求簡單等優(yōu)點(diǎn),但也存在引物設(shè)計(jì)復(fù)雜、產(chǎn)物結(jié)構(gòu)復(fù)雜以及部分定量困難等缺點(diǎn)。選擇是否采用LAMP技術(shù)還需綜合考慮具體實(shí)驗(yàn)需求和條件,以及在實(shí)際應(yīng)用中的可行性。

因此,綜合考慮,qPCR技術(shù)在支原體檢測(cè)的生物醫(yī)藥領(lǐng)域的工業(yè)檢測(cè)中,目前還是難以被取代的。



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