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如何判斷細(xì)胞是否被支原體污染

更新時(shí)間:2024-12-03  |  點(diǎn)擊率:182

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,支原體污染是一個(gè)常見且棘手的問題。支原體是一類極其微小的微生物,缺乏細(xì)胞壁,呈高度多形性,能夠在不知不覺中潛入細(xì)胞培養(yǎng)體系,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、形態(tài)和功能等方面產(chǎn)生諸多不良影響。因此,準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否被支原體污染至關(guān)重要,這關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。以下將詳細(xì)介紹幾種判斷細(xì)胞是否被支原體污染的方法。

一、觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特征

支原體污染嚴(yán)重時(shí),可引起細(xì)胞生長(zhǎng)減慢、培養(yǎng)基pH變酸、細(xì)胞病變等特征。通過觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)特征,可以初步判斷是否存在支原體污染。

  • 細(xì)胞體積變化:支原體的寄生可能影響細(xì)胞的正常代謝和滲透壓調(diào)節(jié),導(dǎo)致細(xì)胞體積異常。一些細(xì)胞可能會(huì)變得腫脹,邊緣模糊不清;而另一些細(xì)胞則可能變小。

  • 細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則:原本應(yīng)該呈多邊形或梭形等典型形態(tài)的細(xì)胞,在支原體污染后可能會(huì)變得扭曲、變形,失去其正常的幾何形狀。

  • 細(xì)胞質(zhì)顆粒增多:支原體感染可能引發(fā)細(xì)胞內(nèi)代謝紊亂,導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)較多的顆粒狀物質(zhì),使細(xì)胞質(zhì)看起來(lái)不再清澈透明。

  • 生長(zhǎng)速度異常:健康細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下具有相對(duì)穩(wěn)定的生長(zhǎng)速度。但被支原體污染后,細(xì)胞的生長(zhǎng)速度可能會(huì)明顯加快或減慢。

二、檢測(cè)細(xì)胞代謝產(chǎn)物

支原體的代謝活動(dòng)可能會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)體系中某些代謝產(chǎn)物的含量。例如,支原體可能會(huì)消耗培養(yǎng)基中的葡萄糖、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),導(dǎo)致其含量下降速度加快;同時(shí),支原體還可能產(chǎn)生一些特殊的代謝產(chǎn)物,如乳酸、氨等,使培養(yǎng)基的酸堿度發(fā)生變化。通過定期檢測(cè)培養(yǎng)基中這些物質(zhì)的含量和酸堿度變化,可以間接推斷細(xì)胞是否被支原體污染。

三、微生物學(xué)檢測(cè)方法

  1. 培養(yǎng)法

將細(xì)胞培養(yǎng)上清液接種到適宜的支原體培養(yǎng)基中,在特定的溫度和氣體環(huán)境下進(jìn)行培養(yǎng)。如果培養(yǎng)基中出現(xiàn)支原體的菌落形態(tài),如煎蛋樣"菌落,則可以初步判斷細(xì)胞被支原體污染。然而,這種方法培養(yǎng)周期較長(zhǎng),通常需要數(shù)天甚至數(shù)周的時(shí)間,且靈敏度相對(duì)較低。

  1. DNA熒光染色法

采用特定的熒光染料,如Hoechst 33258等,這些染料能夠與支原體的DNA特異性結(jié)合。將細(xì)胞進(jìn)行染色處理后,在熒光顯微鏡下觀察。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周圍或內(nèi)部存在著點(diǎn)狀或絲狀的熒光信號(hào),就提示可能存在支原體污染。這種方法相對(duì)快速、靈敏,但也可能會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,需要結(jié)合其他方法進(jìn)行驗(yàn)證。

  1. PCR檢測(cè)法

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)是一種高效的檢測(cè)手段。通過設(shè)計(jì)針對(duì)支原體特異性基因序列的引物,對(duì)細(xì)胞樣本中的DNA進(jìn)行擴(kuò)增。利用凝膠電泳分析擴(kuò)增產(chǎn)物,可以判斷是否存在支原體污染。這種方法靈敏度高、特異性強(qiáng),且檢測(cè)周期短,是目前常用的檢測(cè)方法之一。

  1. 電子顯微鏡觀察

利用電子顯微鏡或免疫電鏡對(duì)樣本進(jìn)行觀察,可以直觀地看到支原體的形態(tài)和分布。這種方法準(zhǔn)確性較高,但受條件限制,且檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng),敏感性不高。

四、預(yù)防措施

為了降低細(xì)胞被支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),需要采取一系列預(yù)防措施:

  • 嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室清潔和消毒程序,確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)。

  • 使用合格的器皿和耗材,避免使用有破損或污染的器皿。

  • 防止空氣污染,盡量減少不必要的進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室,避免引入外來(lái)微生物。

  • 嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室人員的衛(wèi)生,保持良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣。

  • 定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行檢測(cè),以確保沒有微生物滋生。

支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此,需要綜合運(yùn)用多種方法來(lái)判斷細(xì)胞是否被支原體污染,包括觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)特征、檢測(cè)細(xì)胞代謝產(chǎn)物、微生物學(xué)檢測(cè)方法等。同時(shí),還需要采取預(yù)防措施來(lái)降低污染風(fēng)險(xiǎn),確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。只有這樣,才能為科學(xué)研究和臨床診斷提供堅(jiān)實(shí)的技術(shù)支持。



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