国产免费观看久久黄av片,亚洲人成网站观看在线播放 ,精品一区二区三区四区五区六区,国产农村妇女毛片精品久久

當(dāng)前位置:首頁  >  技術(shù)文章  >  為什么不建議用指示細(xì)胞培養(yǎng)法來檢測支原體?

為什么不建議用指示細(xì)胞培養(yǎng)法來檢測支原體?

更新時間:2023-11-05  |  點擊率:471

指示細(xì)胞培養(yǎng)法又稱為指示細(xì)胞法、DNA染色法,該方法的實驗思路是:

培養(yǎng)指示細(xì)胞-樣品上清液收集-上清液接種-染色觀察結(jié)果

 

具體包含以下幾個步驟:

 

將供試品接種于指示細(xì)胞(無污染的Vero 細(xì)胞或經(jīng)國家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他細(xì)胞,供試品應(yīng)對該細(xì)胞生長無影響。下面以Vero細(xì)胞為例)中培養(yǎng)后,用特異熒光染料(如Hoechst 33258)染色,支原體中的核酸也可以被著色,因此,如果待檢測細(xì)胞中含有支原體,那么就會導(dǎo)致指示細(xì)胞被感染,進(jìn)而在細(xì)胞膜或培養(yǎng)基等處發(fā)現(xiàn)藍(lán)色熒光(支原體附著在細(xì)胞膜上,也有可能游離在細(xì)胞培養(yǎng)基中)。

 

指示細(xì)胞培養(yǎng):將指示細(xì)胞復(fù)蘇、傳代,調(diào)整至最佳狀態(tài),留出適宜的量備用。

 

樣品上清液收集:無抗生素培養(yǎng)基中加入待檢測樣品后,細(xì)胞需至少傳一代,然后取細(xì)胞已長滿且3 天未換液的細(xì)胞培養(yǎng)上清液待檢。(為了對待檢測樣品中的支原體進(jìn)行富集)

 

上清液接種:在制備好的指示細(xì)胞培養(yǎng)板中加入一定量的待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清,36°C培養(yǎng)3-5 天。指示細(xì)胞培養(yǎng)物至少傳代1 次,末次傳代培養(yǎng)可用6孔板培養(yǎng)3-5 天。

 

染色觀察:吸出培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)液,加入固定液,放置5分鐘。吸出固定液后進(jìn)行10min的二次固定,再次吸出固定液,使蓋玻片在空氣中干燥。加DNA 染料工作液5ml,加蓋,室溫放置30分鐘,漂洗3次,干燥,封片。用熒光顯微鏡觀察。

 

熒光顯微鏡下可見細(xì)胞表面或培養(yǎng)基中,有大小不等、不規(guī)則的藍(lán)色熒光著色顆粒,則說明有可能存在支原體污染。

 

對于DNA染色法方法,優(yōu)缺點很明顯的:

優(yōu)點:

1、適用于一些不易培養(yǎng)的支原體,如豬鼻支原體,分離培養(yǎng)法對該支原體檢測并不可靠,但可用DNA染色法準(zhǔn)確地檢測出來。

2、操作步驟雖然多,但都相對簡單

3、靈敏度尚可。

 

缺點:

1、時間較長,從Vero細(xì)胞復(fù)蘇、傳代,再到收集上清后再次培養(yǎng),有時甚至需要十幾天時間

2、存在假陽性和假陰性的可能:如一些死亡細(xì)胞釋放出來的DNA會被染成藍(lán)色,出現(xiàn)假陽性;或是由于熒光過若而出現(xiàn)假陰性使結(jié)果出現(xiàn)偏差,因此使用這個方法需要一定的經(jīng)驗。


无码精品视频一区二区三区| 人妻三级日本三级日本三级极| 国产在线拍揄自揄视精品| 最近2019中文字幕大全第二页| 久久人爽人人爽人人片AV| 久久久久久久精品国产怎么下| 男朋友舌头伸进去添好爽视频 | 久久精品国产成人| 免费观看夜里30款禁用软件| 国产免费一区二区三区免费视频| 久久久久人妻一区二区三区 | 久久精品国产精品亚洲色婷婷| 国产精品久久久久久爽爽爽床戏 | 亚洲色欲啪啪久久WWW综合网| 一本色道在线久88在线观看片| 日本边添边摸边做边爱60分钟| 国产精品a∨一区二区三区 | 15学生初次破初视频免费| 久久午夜伦鲁片免费无码| 青草久久欧美又黑又粗又大| 漂亮人妻去按摩被按中出| 国产日产欧洲无码视频精品| 无码精品av久久久奶水| 国产亚洲精品久久久久久小舞| 亚洲色偷精品一区二区三区| 99久久人人爽亚洲精品美女| 4399日本在线观看完整| 国产成a人亚洲精v品无码樱花| 青春草在线视频观看| 无码爽大片日本无码aaa特黄| 野花日本大全免费观看版动漫| 中文字幕人妻无码专区| 日本人三级三妇少| 中文无码一区二区不卡AV| 少妇被又大又粗又爽毛片欧美| 国产精品h片在线播放| 久久精品中文字幕第一页| 无套内谢少妇毛片a片免费视频| 国产啪亚洲国产精品无码| 日本伊人色综合网| 99RE久久精品国产|