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透析胎牛血清:制備與應(yīng)用

更新時間:2023-11-05  |  點擊率:449

胎牛血清是廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)基的重要成分,提供了多種生物活性物質(zhì),包括激素、生長因子、脂質(zhì)、礦物質(zhì)、黏附和鋪展因子,以促進體外細(xì)胞培養(yǎng)。然而,在特定研究領(lǐng)域,透析胎牛血清也被用于滿足研究需求。下文將從生產(chǎn)工藝和應(yīng)用方面對透析胎牛血清進行綜合介紹,以促進相關(guān)研究和應(yīng)用的進行。

 

1. 透析胎牛血清的制備

a. 透析胎牛血清是基于普通胎牛血清進行特殊處理的產(chǎn)品。在制備過程中,普通胎牛血清需要經(jīng)過嚴(yán)格的無菌處理,包括0.1微米膜三重過濾以及各項檢測,如理化性質(zhì)(如滲透壓和pH值),成分(如內(nèi)毒素和血紅蛋白)以及外源因子(如細(xì)菌、病毒和支原體),以確保其質(zhì)量和安全性。

 

b. 透析胎牛血清的制備涉及透析過程,通過特定的透析膜在4°C下將血清透析在0.15M NaCl中。這個透析膜只允許小于10 kDa的小分子通過,這些小分子在滲透壓的作用下從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。透析的終止通常是當(dāng)血清中葡萄糖濃度降至<5 mg/dL時,但透析過程還需要仔細(xì)監(jiān)測pH值和滲透壓。

 

c. 透析過程采用切向流過濾,即流體與過濾方向垂直的過濾方式,以減小濾膜上的物質(zhì)堆積,確保穩(wěn)定的過濾速度。

 

2. 透析胎牛血清的應(yīng)用

透析胎牛血清主要用于特殊研究領(lǐng)域,其中需要關(guān)注小分子濃度的應(yīng)用,包括以下四個領(lǐng)域,它們有時相互交叉。

 

a. 同位素標(biāo)記技術(shù)在細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

同位素標(biāo)記技術(shù),例如Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC),是一種基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)。它通過將13C15N標(biāo)記的氨基酸引入培養(yǎng)基,標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)新合成的蛋白質(zhì),用于比較不同處理下的細(xì)胞蛋白質(zhì)豐度。透析胎牛血清可用于排除天然氨基酸的干擾,以確保標(biāo)記氨基酸的準(zhǔn)確性。

 

b. 工程細(xì)胞株的篩選。

例如,CHO-DFGRˉ細(xì)胞株需要在培養(yǎng)基中添加次黃嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸才能生存。透析胎牛血清可用作選擇培養(yǎng)基的一部分,以幫助篩選經(jīng)過基因工程的細(xì)胞株。

 

c. 研究某些因子對細(xì)胞增殖和分化的影響。

透析胎牛血清可用于研究核苷酸、微量元素等對細(xì)胞的影響,以避免培養(yǎng)體系中的干擾物質(zhì)。


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